■ 產(chǎn)品介紹
SURE（Stop Unwanted Rearrangement Events）感受態(tài)細(xì)胞是設(shè)計(jì)用來克隆在傳統(tǒng)菌株中無法克隆的DNA片段序列的菌株。SURE感受態(tài)菌株缺乏催化重組和刪除非標(biāo)準(zhǔn)二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)， 例如十字形（由反向重復(fù)序列導(dǎo)致）和Z字形的DNA序列的組件。這些非標(biāo)準(zhǔn)二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu)在真核細(xì)胞中經(jīng)常出現(xiàn)，而且這些結(jié)構(gòu)能夠阻礙真核細(xì)胞DNA 在傳統(tǒng)菌株中的克隆。sure感受態(tài)細(xì)胞是限制性內(nèi)切酶陰性的(McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-)，核酸內(nèi)切酶（endA）缺陷，和重組酶(recB recJ)缺陷的。同時(shí)sure感受態(tài)細(xì)胞中所具有的F' 游離基因上面的lacIqZΔM15基因，使得能夠利用藍(lán)白斑進(jìn)行克隆篩選。 |
基因型： | E. coli B e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (KanR) uvrC [F' proAB lacIqZΔM15 Tn10 (TetR)]. |
■ 產(chǎn)品特點(diǎn)
SURE感受態(tài)細(xì)胞主要是用來克隆不穩(wěn)定DNA結(jié)構(gòu)，大腸桿菌DNA修復(fù)系統(tǒng)會針對重復(fù)序列、二級結(jié)構(gòu)（如Z-DNA）等真核DNA進(jìn)行重排或刪除修飾。SURE感受態(tài)細(xì)胞針對uvrC,umuC,SbcC和RecJ等參與修飾的大腸桿菌基因或蛋白進(jìn)行突變，提高了真核來源、不規(guī)則DNA的穩(wěn)定性達(dá)20倍以上，并且適合克隆甲基化DNA。
本身具有Kana和Tet抗性。當(dāng)轉(zhuǎn)化氯霉素抗性質(zhì)粒到sure感受態(tài)細(xì)胞中時(shí)，一定要用100μg/ml的氯霉素平板去篩選。因?yàn)閟ure感受態(tài)細(xì)胞在40μg/μl的氯霉素條件下具有抗性，而對于100μg/μl的氯霉素抗生素具有敏感性。
sure感受態(tài)細(xì)胞可以用于藍(lán)白斑篩選，具有l(wèi)az互補(bǔ)基因。
在載體構(gòu)建過程中，我們經(jīng)常會遇到一些基因片段具有高度的重復(fù)，這導(dǎo)致插入載體中的序列可能會在細(xì)菌擴(kuò)增中不穩(wěn)定，在質(zhì)粒擴(kuò)增中產(chǎn)生形成片段的缺失和重排，如發(fā)現(xiàn)插入片段高頻率地產(chǎn)生缺失和重排，可以嘗試使用重組缺陷大腸桿菌菌株，例如sure感受態(tài)細(xì)胞。
■ 使用方法
建議超凈臺內(nèi)劃線涂板，得到單克隆后再進(jìn)行其他實(shí)驗(yàn)操作，避免雜菌污染。
■ 注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品僅可用于實(shí)驗(yàn)室研究，不能用于動(dòng)物，人體以及作為食品添加劑等用途。
2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
3. 使用甘油菌時(shí)可不完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂布固體瓊脂平板即可，也可完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，菌株的活力會逐漸下降。
